公司新聞
相關(guān)新聞
聯(lián)系我們
河南中潤實驗室工程有限公司是一家專業(yè)進行潔凈實驗室建設(shè)、無菌實驗室設(shè)計、通風(fēng)系統(tǒng)規(guī)劃、氣路系統(tǒng)建設(shè)的廠家，我們能夠根據(jù)您的需求進行實驗室的規(guī)劃設(shè)計，為您搭建合適安全的實驗室，是您一站式實驗室規(guī)劃、實驗室設(shè)備選擇商。
服務(wù)熱線：15538153917
地址：鄭州經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)經(jīng)南三路9號青春美廬1號樓東2單元6號
PCR實驗室的污染類型有哪些？該怎樣預(yù)防呢？
發(fā)布者：admin 發(fā)布時間：2021-08-10 16:43 閱讀：
PCR實驗室可以通過DNA基因追蹤系統(tǒng)來掌握患者體內(nèi)的病毒含量，具有較大擴增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是容易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。那么PCR實驗室的污染類型有哪些？該怎樣預(yù)防呢？
一、PCR實驗室的污染類型
1、樣本間交叉污染
標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染。標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標本間污染。有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導(dǎo)致彼此間的污染。
2、PCR試劑的污染
主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3、PCR擴增產(chǎn)物污染
這是PCR反應(yīng)中最主要最常見的污染問題，因為PCR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/mL)，遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可造成假陽性。
4、實驗室中克隆質(zhì)粒的污染
在分子生物學(xué)實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力，其污染可能性也很大。
二、PCR實驗室的防污染方法
1、嚴格執(zhí)行各區(qū)功能劃分：
試劑儲存和準備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應(yīng)混合液的準備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。
標本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護設(shè)備、個人防護和操作規(guī)范的要求。
擴增區(qū)：cDNA合成、DNA擴增及檢測。
擴增產(chǎn)物分析區(qū)：擴增片段的進一步分析測定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。
試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)和擴增區(qū)內(nèi)的實驗用品，包括移液器等器具應(yīng)專用，空氣、物品流向依次為：試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，不可逆行。
2、清潔的實驗用品：
實驗室自配試劑（去離子水、緩沖液等）和所有使用器具在使用之前均應(yīng)高壓滅菌或紫外殺菌。槍尖、反應(yīng)管等實驗耗材應(yīng)一次性使用。
3、正確的實驗操作：
實驗應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)進行，工作臺內(nèi)應(yīng)放置PCR專用的微量離心機、各量程的移液器和其他必須物品。
實驗的過程中選擇最合適尺寸的手套并能及時更換，在進出不同實驗區(qū)域或進行模板操作后都應(yīng)更換實驗服、口罩、帽子及手套，以避免不同實驗區(qū)交叉污染。
裝有PCR試劑的反應(yīng)管在打開之前應(yīng)先瞬時離心，將管壁及管蓋上的液體離至管底，降低污染手套或加樣器的風(fēng)險；謹慎開啟反應(yīng)管，防止管內(nèi)液體濺出或形成氣溶膠導(dǎo)致污染。
吸加試劑和模板的操作應(yīng)嚴格按照規(guī)范要求進行，遵守“慢吸快打”原則，盡量一次性完成，忌多次抽吸，以避免氣溶膠產(chǎn)生的交叉污染。
PCR試劑建議小量分裝，以減少反復(fù)凍融、重復(fù)取樣次數(shù)；多樣本PCR反應(yīng)時，先配制反應(yīng)混合液分裝至反應(yīng)管中，最后加入樣本核酸，請勿同時開蓋，盡量保證單人單管，實現(xiàn)完全閉管操作。
實驗試劑應(yīng)與樣品和PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同處。
PCR擴增實驗完成后及時將反應(yīng)管取出，用一次性手套將產(chǎn)物反應(yīng)管包裹丟棄，保證管蓋緊閉。
4、規(guī)范的實驗設(shè)計：
應(yīng)遵循實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的相關(guān)規(guī)定，實驗中設(shè)立陽性對照、陰性對照和空白對照，全程質(zhì)控實驗過程，驗證PCR反應(yīng)的可靠性，并協(xié)助判斷擴增系統(tǒng)的可信性。
以上就是PCR實驗室的污染來源及防污染措施。更多實驗室相關(guān)產(chǎn)品信息，敬請關(guān)注河南中潤實驗工程公司官網(wǎng)，產(chǎn)品咨詢及實驗室EPC設(shè)計建設(shè)請聯(lián)系網(wǎng)站客服。
售前咨詢