無菌室亦稱無塵室、潔凈室或清凈室。無菌室的主要功能為室內(nèi)污染控制，沒有無菌室，污染敏感零件不可能批量生產(chǎn)。在FED-STD-2里面，無菌室被定義為具備空氣過濾、分配、優(yōu)化、構(gòu)造材料和裝置的房間，其中特定的規(guī)則的操作程序以控制空氣懸浮微粒濃度，從而達到適當?shù)奈⒘崈舳燃墑e。那么每一個區(qū)域的詳細技術(shù)操作和試劑在下面詳細列出。
1、樣品準備區(qū)
這個區(qū)域?qū)ｉT用作樣品的準備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采納預(yù)防措施：
1)PCR產(chǎn)品和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。
2)組織培育物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理，以依據(jù)應(yīng)用的需求提取DNA或RNA。
3)用于樣品處理的東西不能被用作一般分子克隆的東西，也不能用作操作靶序列。
4)DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作，以防止在羅致樣品時有氣溶膠留傳。
5)大體積樣品應(yīng)該用獨自包裝的無菌一次性移液管羅致。
6)管子翻開前都要簡短離心以削減氣溶膠的發(fā)生，并且管子不能用力崩開，這樣會發(fā)生氣溶膠。
7)任何時候都應(yīng)該穿實驗服和帶手套，手套要經(jīng)常替換，尤其在抽提進程中每一步之間都要替換。實驗服要專門用于樣品準備間，經(jīng)常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCR
RNA-PCR的額外步驟需求額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的時機。為了防止這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報道。
3、前PCR區(qū)
有必要有專門用于準備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個區(qū)域有必要堅持潔凈，并且沒有來自克隆和樣品準備的污染。前PCR區(qū)有必要要有試劑和準備，特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
4、PCR實驗室試劑的操作
1)所用的全部溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)全部PCR試劑中運用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過濾的，并且是高壓滅菌。
3)在20℃到25℃儲存的試劑主張加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不克制擴增反應(yīng)。
4)所用試劑都應(yīng)該以大體積制作，實驗一下看試劑是否滿足，然后分裝成僅夠一次運用的量進行儲存。
5)全部試劑和樣品準備進程中都要運用一次性滅菌的瓶子和管子。
6)新制作的試劑在用于準備新的標本之前應(yīng)該加以查驗。
7)樣品準備和前PCR區(qū)所運用的移液管在不運用時都應(yīng)該當心保存。
5、在前PCR區(qū)樹立PCR混合物
1)可以把立刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實驗室只涉及到擴增一種或少數(shù)幾種特異序列時這樣做很有用。
2)如果你的實驗室運用多套引物，以致于制作包括全部試劑的單一反應(yīng)混合物不行經(jīng)濟，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
3)作為一個規(guī)矩，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品制作和PCR前進程的功率和潔凈程度。并且，你也期望通過運用一個已知的弱陽性樣品來驗證你的樣品緩沖液以證明里邊不含擴增克制物。
4)陰性樣品要與每組樣品一起做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)品的污染，陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的全部試劑。
5)當做陽性對照時，有兩個理由決議了應(yīng)該運用最少數(shù)量的核酸。
6)因為有必要有對照反應(yīng)，對照模板的特色應(yīng)該予以考慮。
6、控制污染的方法
已規(guī)劃出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染?運用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)品引起的污染。另一種控制污染的方法是運用紫外線，這種方法不能徹底消除污染問題，但可以將污染下降幾個數(shù)量級。
7、PCR儀的方位
8、后PCR區(qū)
PCR結(jié)束后，需求分析樣品并說明數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個專門用于反應(yīng)后處理樣品的當?shù)?。后PCR活動中運用的所用試劑、一次性耗材和儀器都有必要是專門用于這一目的，決不能把實驗室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。
以上就是無菌室的要求總結(jié)。更多實驗室相關(guān)產(chǎn)品信息，敬請關(guān)注河南中潤實驗工程公司官網(wǎng)，產(chǎn)品咨詢及實驗室EPC設(shè)計建設(shè)請聯(lián)系網(wǎng)站客服。
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